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Quantification Des Pools De Nucleotides A Laide De La Chromatographie Liquide Couplee A La Spectrometrie De Masse En Tandem
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Book Synopsis Quantification des pools de nucléotides à l'aide de la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem by : Christelle Machon
Download or read book Quantification des pools de nucléotides à l'aide de la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem written by Christelle Machon and published by . This book was released on 2015 with total page 0 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: Les nucléotides, terme regroupant les nucléosides monophosphate, diphosphate et triphosphate, sont impliqués dans de nombreux processus cellulaires. Ils représentent les éléments constitutifs des acides nucléiques, fournissent de l'énergie à des réactions métaboliques, jouent le rôle de transporteurs et seconds messagers. L'exploration des pools nucléotidiques apparaît indispensable afin de connaître leur rôle précis dans des situations physiologiques ou pathologiques. Nous avons développé une méthode de dosage des nucléotides endogènes (formes mono-, di- et triphosphate) par extraction en ligne sur colonne WAX couplée à la LC-MS/MS. La séparation analytique est réalisée sur colonne Hypercarb, sans agent de paire d'ions dans la phase mobile. Grâce à l'utilisation d'un triple quadripôle et une ionisation en mode positif, les nucléotides endogènes sont identifiés sans équivoque, y compris ceux possédant la même masse molaire. L'extraction et la séparation des nucléotides sont réalisées en 20 min. L'ensemble de la méthode, en comptant la ré- équilibration des colonnes, dure 37 min. La méthode de dosage a été validée pour les formes mono- et triphosphate et est applicable à des séries d'une vingtaine d'échantillons biologiques. D'autre part, dans une étude pré-analytique basée sur les plans d'expériences, nous avons comparé les conditions de préparation d'échantillons en vue du dosage de nucléotides intracellulaires dans 4 lignées cellulaires : 2 adhérentes (Messa et NCI-H292) et 2 en suspension (RL et L1210). Nous avons montré que les conditions pré-analytiques optimales dépendent de la lignée cellulaire soulignant ainsi l'importance de cette phase dans l'analyse des nucléotides. Enfin, l'expérience et les connaissances acquises lors du développement de la méthode de dosage des nucléotides ainsi que la large palette de molécules analysables avec cette méthode (nucléosides, nucléotides sucrés, autres métabolites), nous ont permis de développer des collaborations dans le domaine de la cancérologie avec différentes équipes de recherche. Par exemple, nous avons étudié l'implication des pools nucléotidiques dans le stress réplicatif induit par le stress oxydant et dans la reprogrammation cellulaire observée dans les cellules cancéreuses. Ainsi, les informations apportées par notre approche analytique, complémentaires des autres approches utilisées, ont montré l'implication des pools nucléotidiques dans la tumorigénèse. En conclusion, ce travail a permis de développer une technique analytique et de mettre en place une méthode de travail pour le dosage des nucléotides endogènes dans différents milieux biologiques.
Book Synopsis La quantification ciblée de protéines et peptides par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem by : Romain Simon
Download or read book La quantification ciblée de protéines et peptides par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem written by Romain Simon and published by . This book was released on 2012 with total page 0 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: En recherche clinique ou environnementale, les biomarqueurs protéiques présentent un intérêt croissant. Bien que les immuno-dosages restent les méthodes de référence pour leur quantification, les récentes avancées en spectrométrie de masse (MS) font de cette technique une alternative crédible à l'ELISA. Ce travail apporte quelques éléments méthodologiques pour repousser certaines limitations de la MS. D'abord, deux dosages ont été proposés. Celui réalisé chez G. fossarum représente le premier exemple de dosage de la Vitellogénine chez un invertébré par LC-MS/MS. L'un des défis de la méthode présentée est de doser spécifiquement une protéine dans un organisme dont le génome est majoritairement inconnu. Le second dosage concerne les peptides contenant une méthionine. Nous avons développé un protocole d'oxydation des méthionines afin de s'affranchir du biais lié à leur oxydation partielle. Cette méthode a ensuite été appliquée à une protéine impliquée dans la maladie d'Alzheimer (l'Apolipoprotéine E4) dans une cohorte de 673 plasmas. Ce dosage est à ce jour l'une des plus grandes études réalisées par LC-MS/MS et montre toute la robustesse de cette approche. Enfin, l'influence de la phase mobile sur la sensibilité des dosages de peptides a été étudiée : d'abord en phase inverse, où le méthanol est une bonne alternative à l'acétonitrile ; ensuite en HILIC, où les difficultés liées à l'étude d'ions multichargés en milieu majoritairement organique ont été abordées. Les problèmes liés à la capacité de charge des colonnes ont également été soulevés. La chromatographie HILIC reste prometteuse pour la quantification de peptides puisqu'un facteur dix en sensibilité peut être apporté.
Book Synopsis La spectrométrie de masse en couplage avec la chromatographie en phase gazeuse by : BOUCHONNET Stéphane
Download or read book La spectrométrie de masse en couplage avec la chromatographie en phase gazeuse written by BOUCHONNET Stéphane and published by Lavoisier. This book was released on 2009-09-09 with total page 211 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: Premier ouvrage spécifiquement consacré à ce couplage, La spectrométrie de masse en couplage avec la chromatographie en phase gazeuse se différencie des autres publications scientifiques dédiées à la spectrométrie de masse en abordant la technologie avec une réelle volonté didactique. Ce manuel propose une démarche ancrée dans la pratique et offre des atouts décisifs pour gagner en temps et en qualité : une approche simple et précise du principe de fonctionnement des spectromètres de masse utilisés en couplage GC-MS, avec un minimum d'équations mathématiques, un comparatif des différents types de sources, d'analyseurs et de détecteurs, une mise en avant des aspects pratiques tels que la stratégie de mise au point d'une méthode de dosage ou l'utilisation d'une bibliothèque de spectres, un inventaire des problèmes et des "pièges" habituellement rencontrés par les utilisateurs de couplage GC-MS, un recueil des erreurs les plus communément commises et les solutions claires pour s'en affranchir. Ces conseils sont illustrés par de nombreux exemples choisis dans des domaines aussi divers que la toxicologie ou l'analyse environnementale avec toujours un double objectif pour les utilisateurs : leur permettre de tirer rapidement le meilleur parti de leur spectromètre de masse, les assister dans la détermination du matériel et des méthodes les plus appropriés à un contexte analytique donné (identification structurale, dosages multi-résidus, détermination de composés à l'état de traces en matrices complexes, etc.).
Book Synopsis Développement et validation d'une méthode analytique en chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en mode tandem by : Tatiana Martynova
Download or read book Développement et validation d'une méthode analytique en chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en mode tandem written by Tatiana Martynova and published by . This book was released on 2005 with total page 156 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt:
Book Synopsis Couplage avancé de type HPLC avec préconcentration en ligne et spectrométrie de masse (SPE-LC/MS/MS) by : Yvan Gru
Download or read book Couplage avancé de type HPLC avec préconcentration en ligne et spectrométrie de masse (SPE-LC/MS/MS) written by Yvan Gru and published by . This book was released on 2010 with total page 280 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: De nombreux composés d’origine anthropique sont détectés dans l’environnement, particulièrement dans les eaux de surface utilisées comme ressource. Parmi ces molécules, les pesticides, bien qu’ils soient parfois présents à de très faibles concentrations, peuvent causer des dommages sanitaires ou environnementaux. La préparation de l’échantillon et la méthode de détection sont les deux points critiques de la qualité du dosage de tels substances dans les eaux. L’extraction demeure notamment une étape fastidieuse qui génère des problèmes de récupération. Pour les réduire, une technique de chromatographie liquide avec préconcentration en ligne (SPE-LC) couplée à un spectromètre de masse de type piège ionique linéaire (LIT) a été développée et validée en matrice eau propre (type eau d’Evian) et en eau de rivière (type rivière Loire - Nantes). Les critères de performances retenus étaient les suivants : exactitude, reproductibilité, sélectivité et sensibilité afin d’atteindre aisément des limites de quantification (LQ) au niveau 10 ng/L, pour un grand nombre de molécules. Près de 210 pesticides sont analysés dans le même run chromatographique en mode ElectroSpray positif. 2 ml d’échantillon d’eau sont percolés à travers une cartouche appropriée. Les LQ atteintes dans les deux matrices sont, pour la plupart des molécules inférieures ou égales à 10 ng/L. Les résultats montrent que la SPE-LC couplée à la spectrométrie de masse en tandem (MS/MS) est une technique adaptée, entièrement automatisable, pour réaliser une analyse multi-résidus de routine dans ces types d’eaux. La dégradation des molécules a par la suite été étudiée par la recherche de quelques métabolites, et aussi par la modification des conditions de stockage, montrant ainsi l’importance d’évaluer la stabilité des composés en milieu aqueux (hydrolyse, photolyse). L’étude s’est ensuite focalisée sur la qualité d’identification des composés par l’utilisation du mode d’acquisition MRM-EPI (Full scan MS/MS) disponible sur ce type de spectromètre. Ce mode de balayage se révèle comme un outil de choix pour assurer l’identification en dosage multi-résidus. Enfin, le thème d’effet matrice a été largement abordé, car la technique développée donnait lieu à des suppressions de signal non négligeables pour un certain nombre de composés (exaltations de signal plus rarement). L’origine de ces effets matrice a été évaluée par des essais d’introduction post-colonne, montrant que l’ionisation par Electrospray est un point critique. Il a fallu apporter des solutions à la maîtrise et à la réduction de ces effets incommodants pour la restitution juste d’une concentration d’un analyte présent dans un échantillon d’eau. L’étalonnage interne s’est montré efficace et ainsi a été choisi, par application ou non d’un étalon interne adapté pour une molécule précise.
Book Synopsis Couplage avancé de type HPLC avec préconcentration en ligne et spectrométrie de masse (SPE-LC/MS/MS) by : Yvan Gru
Download or read book Couplage avancé de type HPLC avec préconcentration en ligne et spectrométrie de masse (SPE-LC/MS/MS) written by Yvan Gru and published by . This book was released on 2011 with total page 0 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: De nombreux composés d’origine anthropique sont détectés dans l’environnement, particulièrement dans les eaux de surface utilisées comme ressource. Parmi ces molécules, les pesticides, bien qu’ils soient parfois présents à de très faibles concentrations, peuvent causer des dommages sanitaires ou environnementaux. La préparation de l’échantillon et la méthode de détection sont les deux points critiques de la qualité du dosage de tels substances dans les eaux. L’extraction demeure notamment une étape fastidieuse qui génère des problèmes de récupération. Pour les réduire, une technique de chromatographie liquide avec préconcentration en ligne (SPE-LC) couplée à un spectromètre de masse de type piège ionique linéaire (LIT) a été développée et validée en matrice eau propre (type eau d’Evian) et en eau de rivière (type rivière Loire - Nantes). Les critères de performances retenus étaient les suivants : exactitude, reproductibilité, sélectivité et sensibilité afin d’atteindre aisément des limites de quantification (LQ) au niveau 10 ng/L, pour un grand nombre de molécules. Près de 210 pesticides sont analysés dans le même run chromatographique en mode ElectroSpray positif. 2 ml d’échantillon d’eau sont percolés à travers une cartouche appropriée. Les LQ atteintes dans les deux matrices sont, pour la plupart des molécules inférieures ou égales à 10 ng/L. Les résultats montrent que la SPE-LC couplée à la spectrométrie de masse en tandem (MS/MS) est une technique adaptée, entièrement automatisable, pour réaliser une analyse multi-résidus de routine dans ces types d’eaux. La dégradation des molécules a par la suite été étudiée par la recherche de quelques métabolites, et aussi par la modification des conditions de stockage, montrant ainsi l’importance d’évaluer la stabilité des composés en milieu aqueux (hydrolyse, photolyse). L’étude s’est ensuite focalisée sur la qualité d’identification des composés par l’utilisation du mode d’acquisition MRM-EPI (Full scan MS/MS) disponible sur ce type de spectromètre. Ce mode de balayage se révèle comme un outil de choix pour assurer l’identification en dosage multi-résidus. Enfin, le thème d’effet matrice a été largement abordé, car la technique développée donnait lieu à des suppressions de signal non négligeables pour un certain nombre de composés (exaltations de signal plus rarement). L’origine de ces effets matrice a été évaluée par des essais d’introduction post-colonne, montrant que l’ionisation par Electrospray est un point critique. Il a fallu apporter des solutions à la maîtrise et à la réduction de ces effets incommodants pour la restitution juste d’une concentration d’un analyte présent dans un échantillon d’eau. L’étalonnage interne s’est montré efficace et ainsi a été choisi, par application ou non d’un étalon interne adapté pour une molécule précise.
Book Synopsis High-throughput Analysis of Small Molecules in Biological Fluids Using Liquid Chromatography Coupled to Mass Spectrometry by : Emmanuel Bourgogne
Download or read book High-throughput Analysis of Small Molecules in Biological Fluids Using Liquid Chromatography Coupled to Mass Spectrometry written by Emmanuel Bourgogne and published by . This book was released on 2007 with total page 254 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: Ce travail s'articule en 4 parties. Dans un premier temps, une énumération sera faite des différentes techniques et stratégies actuellement utilisées en bioanalyse pour la quantification par spectrométrie de masse de petites molécules d'intérêt pharmaceutique dans des fluides biologiques. Dans un second temps, différentes stratégies utilisant le système de SPE en ligne Prospekt 2, dans lequel l'extraction de l'échantillon est totalement intégrée avec le système LC-MS, seront développées. Des interférents endogènes issus des fluides biologiques peuvent générer des phénomènes de suppression, voire d'augmentation d'ionisation, connus sous le nom d'effet matrice. Dans un troisième temps, une nouvelle approche utilisant l'analyse en composante principale permettra de visualiser les composants plasmatiques susceptibles d'être responsables de cet effet matrice. Enfin, une nouvelle technique de quantification, associant une source d'ionisation de type MALDI équipée d'un laser à haute vitesse et couplée à un spectromètre de masse en mode tandem opérant en mode SRM, sera décrite.
Book Synopsis Evaluation du couplage entre la chromatographie en phase liquide et la spectrometrie de masse en tandem pour les analyses protéomiques by : Delphine Pflieger
Download or read book Evaluation du couplage entre la chromatographie en phase liquide et la spectrometrie de masse en tandem pour les analyses protéomiques written by Delphine Pflieger and published by . This book was released on 2004 with total page 277 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt:
Book Synopsis Chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse by : Laurent Bismuth
Download or read book Chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse written by Laurent Bismuth and published by . This book was released on 2000 with total page 216 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt:
Book Synopsis Utilisation de la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse pour l'analyse de médicaments dans les fluides biologiques by : Didier Patrick Ortelli
Download or read book Utilisation de la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse pour l'analyse de médicaments dans les fluides biologiques written by Didier Patrick Ortelli and published by . This book was released on 2001 with total page 236 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: Ce travail avait pour buts de déterminer le potentiel de la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse pour l'analyse de médicaments dans les fluides biologiques et de tester de nouvelles techniques de préparation d'échantillons pouvant être couplées à la séparation chromatographique. La méthadone a été employée comme molécule modèle et analysée dans différents fluides biologiques dans le cadre d'une étude clinique. Différentes techniques d'extraction ont été testées. Parmi celles-ci, l'extraction sur phase solide en ligne a été particulièrement étudiée afin d'automatiser et de réduire le temps de l'analyse. Ainsi, les phases à accès restreint ont été testées pour l'analyse de la méthadone et ses métabolites. Finalement, deux applications employant la LC-MS ont été développées. La première concerne le dosage d'un composé antimalarique dans le plasma et la seconde concerne l'identification et le dosage de diterpénoides dans des extraits d'huile de graines de l'épurge.
Book Synopsis Mass Spectrometry and Genomic Analysis by : J.N. Housby
Download or read book Mass Spectrometry and Genomic Analysis written by J.N. Housby and published by Springer Science & Business Media. This book was released on 2005-12-20 with total page 161 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: 76 2. Short Oligonucleotide Mass Analysis 76 2. 1. Method Outline 76 2. 2. Design of PCR Primers and Fragments for Analysis 78 2. 3. Typical PCR Reaction Conditions 79 3. Electrospray Ionisation Mass Spectrometry 79 Formation of Ions 3. 1. 79 3. 2. Tandem Mass Spectrometry 79 3. 3. Typical ESI-MS Settings for SOMA 80 4. Purification Procedures 80 4. 1. Phenol/Chloroform Extraction and Ethanol Precipitation 80 4. 2. In-line HPLC Purification 81 5. Genotyping Using SOMA 81 5. 1. APC Genotyping in Human Subjects 81 5. 2. APC Genotyping in Min Mice 85 5. Mutation Detection Using SOMA 86 6. 1. Analysis of p53 Mutations in Liver Cancer Patients 86 6. 1. 1. p53 Mutations in Liver Tumours 87 6. 1. 2. p53 Mutations in Plasma Samples 88 7. Advantages and Disadvantages of SOMA 89 8. Future Perspectives 90 9. Acknowledgements 91 10. References 91 CHAPTER 7 WV. Bienvenut, M. Müller, PM. Palagi, E. Gasteiger, M. Heller, E. Jung, M. Giron, R. Gras, S. Gay, PA. Binz, G J. Hughes, JC. Sanchez, RD. Appel, DF. Hochstrasser Proteomics and Mass Spectrometry: Some Aspects and Recent Developments 1. Introduction to Proteomics 93 2. Protein Biochemical and Chemical Processing Followed by Mass Spectrometric Analysis 94 2. 1. 2-DE Gel Protein Separation 95 Protein Identification Using Peptide Mass Fingerprinting and Robots 96 2. 2. 2. 2. 1. MALDI-MS Analysis 98 2. 2. 2. MS/MS Analysis 102 Improvement of the Identification by Chemical Modification of Peptides 106 2. 2. 3.
Book Synopsis Analyse par chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse d'acides aminés et de petits peptides non dérivés dans des matrices agroalimentaires by : Marine de Person
Download or read book Analyse par chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse d'acides aminés et de petits peptides non dérivés dans des matrices agroalimentaires written by Marine de Person and published by . This book was released on 2005 with total page 280 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: L'analyse qualitative et quantitative des acides aminés et des petits peptides dans les matrices complexes représente un enjeu indéniable dans de nombreux domaines d'application (agroalimentaire, pharmaceutique, exobiologie, ...). Les méthodes d'analyse que nous proposons dans ce mémoire font appel à la chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse sans étape de dérivation. La premiere partie du mémoire est consacrée à l'identification et au dosage de petits peptides dans des vins de Champagne. La méthodologie d'analyse est basée sur le couplage de la chromatographie de paire d'ions en milieu acide à la spectrométrie de masse à source electrospray en mode d'ionisation positif. Elle a été optimisée puis validée selon les critères classiques de validation. La seconde partie du mémoire a trait au développement de deux nouvelles méthodes séparatives complémentaires, compatibles avec un mode d'ionisation négatif. La première fait appel à la chromatographie de paire d'ions en milieu alcalin avec des agents d'appariement d'ions volatils (n-alkylammonium) sur silice greffée octadécyle et sur carbone graphitique poreux. La seconde utilise la chromatographie d'interactions hydrophiles sur une phase stationnaire polymérique de type amino. Une validation de ces méthodes a été développée. Enfin, une étude comparative des performances de deux sources d'ionisation de type electrospray associées à des interfaces différentes a été réalisée dans le cadre de l'analyse des acides aminés non dérivés.
Book Synopsis Application du couplage chromatographie liquide-spectrométrie de masse à l'étude de la biodisponibilité de peptides issus de produits laitiers et à la protéomique by : François Delalande
Download or read book Application du couplage chromatographie liquide-spectrométrie de masse à l'étude de la biodisponibilité de peptides issus de produits laitiers et à la protéomique written by François Delalande and published by . This book was released on 2003 with total page 252 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: Le couplage chromatographie liquide-spectrométrie de masse est devenu une méthode de choix pour la quantification de molécules dans une matrice, la détermination des séquences primaires de peptides et de protéines ainsi que la mise en évidence de modifications post-traductionnelles. Les progrès réalisés tant au niveau de la LC qu'au niveau de la spectrométrie de masse ont aussi révolutionné la biologie en permettant une identification sur des quantités femtomolaires de protéines séparées par électrophorèse bidimensionelle dans le cadre d'études protéomiques et la détection toujours plus sensible de molécules d'intérêt par exemple dans les fluides biologiques (plasma, urine, LCR).Mon travail de thèse a porté sur le choix et la mise au point de stratégies instrumentales et analytiques en optimisant de façon poussée tous les paramètres du couplage LC-MS et LC-MS-MS. La première partie concerne la mise au point expérimentale de techniques de microLC-MS et microLC-MS-MS pour la caractérisation de composés peptidiques et la mesure de leur biodisponibilité. La seconde partie porte sur le développement, l'optimisation et l'utilisation de la nano-LC-MS pour l'étude protéomique avec une première étude protéomique visant à caractériser les interactions entre le riz et le rice yellow mottle virus. Ce travail a permis par les techniques MALDI-MS et LC-MS-MS, de mettre en évidence les protéines du riz recrutées par les protéines de capside du virus et l'identification des protéines différentiellement exprimées selon la variété de riz (résistant/sensible). La seconde étude protéomique concerne la caractérisation de marqueurs d'expressions liés à l'anomalie "Mantled" chez le palmier à huile faisant appel au séquençage de novo. Pour conclure, nous avons utilisé les multiples potentiels du couplage microLC-MS et nanoLC-MS-MS pour répondre à différents problèmes biologiques. Ces réponses n'ont pu être obtenues que grâce à la mise au point de méthodologie particulière.
Book Synopsis Développement de méthodes analytiques pour la détection et la quantification de traces de produits pharmaceutiques dans les eaux du fleuve Saint Laurent by : Araceli García Ac
Download or read book Développement de méthodes analytiques pour la détection et la quantification de traces de produits pharmaceutiques dans les eaux du fleuve Saint Laurent written by Araceli García Ac and published by . This book was released on 2010 with total page pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: Le présent projet vise à documenter la nécessité d'augmenter notre connaissance de la présence des contaminants organiques tels que les médicaments dans l'environnement et d'évaluer leur devenir environnemental. On a étudié la présence de composés pharmaceutiques dans différents échantillons d'eau. On a focalisé nos efforts spécialement sur les échantillons d'eau de l'usine d'épuration de la Ville de Montréal et ses effluents, les eaux de surface avoisinantes et l'eau du robinet dans la région de Montréal. Pour ce faire, on a tout d'abord développé deux méthodes analytiques automatisées basées sur la chromatographie liquide avec extraction en phase solide (SPE) couplée à la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem (LC-MS/MS). On a également étudié les performances des trois techniques d'ionisation à pression atmosphérique (API), pour ensuite les utiliser dans la méthode analytique développée. On a démontré que l'ionisation par électronébulisation (ESI) est une méthode d'ionisation plus efficace pour l'analyse des contaminants pharmaceutiques dans des échantillons de matrices très complexes comme les eaux usées. Une première méthode analytique SPE couplée à la LC-MS/MS a été développée et validée pour l'étude des échantillons complexes provenant de l'usine d'épuration de la Ville de Montréal et des eaux de surface près de l'usine. Cinq médicaments de prescription ont été étudiés: le bézafibrate (un régulateur de lipides), le cyclophosphamide et le méthotrexate (deux agents anticancéreux), l'orlistat (un agent anti-obésité) et l'énalapril (utilisé dans le traitement de l'hypertension). La plupart de ces drogues sont excrétées par le corps humain et rejetées dans les eaux usées domestiques en faisant par la suite leur chemin vers les usines municipales de traitement des eaux usées. On a pu démontrer qu'il y a un faible taux d'élimination à l'usine d'épuration pour le bézafibrate et l'énalapril. Ces deux composés ont aussi été détectés dans les eaux de surface sur un site à proximité immédiate de la décharge de l'effluent de la station d'épuration. i En observant la nécessité de l'amélioration des limites de détection de la première méthode analytique, une deuxième méthode a été développée. Pour la deuxième méthode, un total de 14 contaminants organiques, incluant trois agents anti-infectieux (clarithromycin, sulfaméthoxazole et triméthoprime), un anticonvulsant (carbamazépine) et son produit de dégradation (10,11-dihydrocarbamazépine), l'agent antihypertensif (enalapril), deux antinéoplastiques utilisés en chimiothérapie (cyclophosphamide et méthotrexate), des herbicides (atrazine, cyanazine, et simazine) et deux produits de transformation de l'atrazine (deséthylatrazine et déisopropylatrazine) ainsi qu'un agent antiseptique (triclocarban). Ces produits ont été quantifiés dans les eaux de surface ainsi que dans l'eau du robinet. L'amélioration des limites de détection pour cette méthode a été possible grâce à la charge d'un volume d'échantillon supérieur à celui utilisé dans la première méthode (10 mL vs 1 mL). D'autres techniques de confirmation, telles que les spectres des ions produits utilisant une pente d'énergie de collision inverse dans un spectromètre de masse à triple quadripôle et la mesure des masses exactes par spectrométrie de masse à temps d'envol, ont été explorées. L'utilisation d'un analyseur de masse à temps d'envol a permis la confirmation de 6 des 14 analytes. Finalement, étant donné leur haute toxicité et pour évaluer leur persistance et leur transformation au niveau du traitement des eaux potables, la cinétique d'oxydation du cyclophosphamide et de méthotrexate avec l'ozone moléculaire et des radicaux OH a été étudiée. Les constantes de dégradation avec l'ozone moléculaire ont été calculées et la qualité de l'eau après traitement a pu être évaluée. Le rendement du processus d'ozonation a été amélioré pour la cyclophosphamide dans les eaux naturelles, en raison de la combinaison de réactions directes et indirectes. Cette étude a montré que l'ozone est très efficace pour oxyder le méthotrexate mais que le cyclophosphamide serait trop lent à s'oxyder pour un traitement efficace aux conditions usuelles de traitement de l'eau potable.
Book Synopsis CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PRESSION COUPLEE A LA SPECTROMETRIE DE MASSE by : MARIE-VERONIQUE.. DRAPE PELRAS
Download or read book CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PRESSION COUPLEE A LA SPECTROMETRIE DE MASSE written by MARIE-VERONIQUE.. DRAPE PELRAS and published by . This book was released on 1990 with total page pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt:
Book Synopsis La spectrométrie de masse à ultrahaute résolution au service de la chimie des biomolécules by : Ludovic Muller
Download or read book La spectrométrie de masse à ultrahaute résolution au service de la chimie des biomolécules written by Ludovic Muller and published by . This book was released on 2011 with total page 184 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: Le spectromètre de masse hybride en tandem le LTQ-Orbitrap, dans lequel les ions sont détectés avec une grande précision en masse, a été utilisé dans les deux stratégies différentes de la métabolomique, c'est-à-dire l’approche globale et ciblée. Dans l’approche dite ciblée, il s’agit de mesurer la concentration de métabolites connus ou révélés par la transcriptomique ou la protéomique. Mais dès lors le problème majeur est la quantification absolue de ces métabolites, qui est généralement faite en LC/MS/MS en mode MRM (multiple réaction monitoring) dans les instruments hybrides de type spatiaux (exemple : triple quadripôle). Ce mode de balayage repose sur le suivi d’une voie de fragmentation du métabolite d’intérêt. La LC/FTMS ne nécessite pas de ciblé son analyse sur un seul ion précurseur. Elle permet le balayage sur toute une gamme de masse (de m/z), on propose ainsi une méthode de détection globale des masses basée sur la technologie Orbitrap . Dans l’approche globale, il s’agit de déterminer les flux métabolomiques dans un tissu ou fluide biologique en fonction de son environnement afin de déterminer des biomarqueurs. Bien que guidée par les statistiques, l’analyse de ces échantillons est complexe, aux vus du nombre de signaux détectés. La FTMS (Spectrométrie de Masse à Transformée de Fourrier), couplée généralement à la chromatographie liquide, permet d’avoir une unique composition élémentaire pour les métabolites de faibles masses moléculaires (inférieures à 500 u) permettant ainsi de faciliter l’identification des métabolites. Une alternative attrayante est l’injection directe automatisée (FIA) de l’échantillon complexe, mais elle entraine une perte d’information. Le but de ma thèse a été dès lors d’optimiser le traitement des données issu de FIA-FTMS et de quantifier la perte d’information inhérente à cette approche. Enfin, on utilise ce spectromètre pour l’étude de complexe non-covalent visant à caractériser l’interaction de complexes peptide-peptide et ADN-peptide. On observe une interaction non covalente très forte entre les résidus arginine et les groupements phosphate. Cette thèse montre le rôle joué par les formes zwitterioniques dans la stabilisation de tels complexes. Les mécanismes, expliquant les différentes voies de fragmentations, sont proposés et impliquent la formation de pont salin entre les espèces expliquant sa grande stabilité en phase gazeuse
Book Synopsis DEVELOPPEMENT DU COUPLAGE DE LA CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE AVEC LA SPECTROMETRIE DE MASSE PAR L'INTERFACE FAB A FLUX CONTINU. CARACTERISATION DES PROTEINES H, T ET L DU COMPLEXE DE LA GLYCINE DECARBOXYLASE DES FEUILLES DE POIS by : VERONIQUE.. LOUVET MERAND
Download or read book DEVELOPPEMENT DU COUPLAGE DE LA CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE AVEC LA SPECTROMETRIE DE MASSE PAR L'INTERFACE FAB A FLUX CONTINU. CARACTERISATION DES PROTEINES H, T ET L DU COMPLEXE DE LA GLYCINE DECARBOXYLASE DES FEUILLES DE POIS written by VERONIQUE.. LOUVET MERAND and published by . This book was released on 1994 with total page 178 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: AU COURS DE CE TRAVAIL NOUS AVONS UTILISE DIFFERENTES TECHNIQUES DE SPECTROMETRIE DE MASSE DESTINEES A RESOUDRE DES PROBLEMES ANALYTIQUES DANS LE DOMAINE DE LA STRUCTURE DES PROTEINES. DANS LE BUT DE GAGNER DU TEMPS ET DE LA SENSIBILITE DANS LES ANALYSES, NOUS AVONS DEVELOPPE LE COUPLAGE DE LA CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE (HPLC) AVEC LA SPECTROMETRIE DE MASSE (MS) EN MODE FAB FAST ATOM BOMBARDMENT PAR L'INTERFACE FAB A FLUX CONTINU (CF/FAB). CE COUPLAGE A ETE REALISE AVEC DES COLONNES CAPILLAIRES DE DIAMETRE INTERNE 0,25 MM. IL S'EST AVERE ETRE BIEN ADAPTE A L'ETUDE DE MELANGES COMPLEXES DE PEPTIDES DE MASSES INFERIEURES A 5000 DA AVEC UNE SENSIBILITE DE L'ORDRE DE 20 A 200 PMOL POUR UN PEPTIDE DE MASSE 1000 DA. CETTE SENSIBILITE DECROIT AU FUR ET A MESURE QUE NOUS ELEVONS DANS LE DOMAINE DE MASSE. PAR LA SUITE, LES TECHNIQUES DE COUPLAGE DE L'HPLC AVEC LA SPECTROMETRIE DE MASSE, PAR L'INTERFACE CF/FAB MAIS AUSSI PAR L'INTERFACE ELECTROSPRAY (ESI), ONT ETE UTILISEES POUR L'ETUDE DE LA STRUCTURE PRIMAIRE ET DES MODIFICATIONS POST-TRADUCTIONNELLES DES PROTEINES H, T ET L DU COMPLEXE DE LA GLYCINE DECARBOXYLASE DES MITOCHONDRIES DES FEUILLES DE POIS. AINSI, LES ANALYSES DES FRAGMENTS ISSUS DE COUPURES CHIMIQUES OU ENZYMATIQUES DES PROTEINES H (14,1 KDA) ET T (40,9 KDA) ONT PERMIS DE VERIFIER LES SEQUENCES DE CES DEUX PROTEINES ETABLIES A PARTIR DE LEURS ADNC. NOUS AVONS AUSSI LOCALISER LA POSITION EXACTE DU COFACTEUR LIPOATE DE LA PROTEINE H. LA MESURE DE LA MASSE DE LA PROTEINE L (49,7 KDA) CONFIRME LA SEQUENCE DE LA PROTEINE. DE PLUS, ELLE MONTRE QU'IL N'Y A DE LIAISON COVALENTE NI ENTRE LES DEUX SOUS UNITES DE LA PROTEINE, NI ENTRE LA PROTEINE ET SON COFACTEUR, ET QUE LA PROTEINE L CONTIENT UNE MODIFICATION POST-TRADUCTIONNELLE DE 32 DA ENVIRON
