Contribution A Letude De La Purification Des Proteines Dinteret Therapeutique Par Electrophorese A Focalisation Isoelectrique Segmentee

Author : LAURENT.. BERTHIER
Publisher :
ISBN 13 :
Total Pages : 125 pages
Book Rating : 4.:/5 (49 download)

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Download or read book CONTRIBUTION A L'ETUDE DES PROTEINES DES MOUTS ET DES VINS DE CHAMPAGNE written by LAURENT.. BERTHIER and published by . This book was released on 1999 with total page 125 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: PARMI LES COMPOSES DECRITS COMME AYANT UNE ACTION STABILISANTE SUR LA MOUSSE DES BOISSONS EFFERVESCENTES, LES GLYCOPROTEINES SEMBLENT ETRE PARTICULIEREMENT IMPLIQUEES. CELLES-CI SONT PRESENTES DANS LES MOUTS ET VINS DE CHAMPAGNE A DE FAIBLES TENEURS. LE FRACTIONNEMENT PAR CHROMATOGRAPHIE D'ECHANGE D'IONS N'AUTORISE PAS LEUR PURIFICATION, A CAUSE DE LEURS CARACTERISTIQUES INTRINSEQUES. C'EST POURQUOI, NOUS NOUS SOMMES ORIENTES VERS LA RECHERCHE D'ACTIVITES BIOLOGIQUES, SOUVENT MISES A PROFIT DANS UNE STRATEGIE DE PURIFICATION. LES VEGETAUX ET LES LEVURES CONTIENNENT UN GRAND NOMBRE DE LECTINES DONT LA PLUPART SONT GLYCOSYLEES. APRES AVOIR MIS EN EVIDENCE L'EXISTENCE D'ACTIVITES ERYTHROAGGLUTINANTES PARMI LES PROTEINES DE LA BAIE DE RAISIN (CEPAGE CHARDONNAY), IL NOUS A PARU OPPORTUN D'ENTREPRENDRE LA PURIFICATION DE CETTE LECTINE. UNE PRE-PURIFICATION CONSISTE EN UN FRACTIONNEMENT DES PROTEINES TOTALES SUR COLONNE DE CONCANAVALINE A ; LA FRACTION RETENUE EST ENSUITE RECHROMATOGRAPHIEE SUR COLONNE DE Q-SEPHAROSE. PARMI LES COMPOSES INHIBITEURS DE L'ACTIVITE BIOLOGIQUE TESTES, SEULS LES PARA-NITROPHENYLS-GLYCOSIDES PRESENTENT UNE AFFINITE MARQUEE. LES FRACTIONS PRESENTANT UNE REPONSE POSITIVE A L'AGGLUTINATION DES ERYTHROCYTES TRYPSINISES OU DESIALYLES SONT RASSEMBLEES PUIS SOUMISES A UNE COLONNE D'AFFINITE DE PARA-AMINOPHENYL--D-GLUCOSIDE-SEPHAROSE. L'ELUTION EST EFFECTUEE PAR CHANGEMENT DE TAMPON METTANT EN JEU LA PRESENCE D'AMINOACIDES PROTONABLES AU SEIN DU SITE NON-CATALYTIQUE. A PARTIR DE 200 MG DE LYOPHILISAT DE MACROMOLECULES ISOLEES PAR ULTRAFILTRATION, 325 G DE LECTINE ONT PU ETRE AINSI ISOLES. UNE ANALYSE EN ELECTROPHORESE SDS-PAGE REVELE LA PRESENCE D'UNE SEULE BANDE D'UNE MASSE MOLECULAIRE D'ENVIRON 13000. UNE CHROMATOGRAPHIE DE GEL FILTRATION INDIQUE QUE LA LECTINE PURIFIEE EST MONOMERIQUE. TROIS BANDES SONT VISUALISEES APRES FOCALISATION ISOELECTRIQUE A DES PL RESPECTIVEMENT EGAUX A 4,1 ; 4,4 ET 4,9 CORRESPONDANT VRAISEMBLABLEMENT A TROIS ISOFORMES. CETTE LECTINE NE SEMBLE PAS ETRE CONSERVEE DURANT LA VINIFICATION. UNE DEUXIEME PROTEINE, PRESENTANT LA MEME ACTIVITE BIOLOGIQUE, A PU ETRE ISOLEE D'UN VIN CHAMPENOIS PAR CHROMATOGRAPHIE D'AFFINITE SUIVIE D'UNE IEF PREPARATIVE. UNE CHROMATOGRAPHIE PREPARATIVE SUR SEPHACRYL S200 TERMINE LA PURIFICATION. LA MASSE MOLECULAIRE DETERMINE PAR CHROMATOGRAPHIE (20100) OU PAR SDS-PAGE (19000) REVELE SA STRUCTURE MONOMERIQUE. NOUS MONTRONS PAR IMMUNOLOGIE ET ANALYSE DES SUCRES L'ORIGINE LEVURIENNE DE CETTE PROTEINE RICHE EN MANNOSE.